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滑菇多糖对K562白血病细胞增殖的抑制及Caspase-3基因表达的影响

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四军医大学学报 (』

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研究原著

文章编号: 1 0 0 0 - 2 7 9 0 ( 2 0 0 7 ) 1 5 - 1 3 9 3 - 0 4

滑菇多糖对 K5 6 2白血病细胞增殖的抑制及 C a s p a s e - 3基因表达的影响 赵俊霞,郑力芬,赵娟,申 园,王彦玲,闫蕴力 (河北医科大学基础医学院细胞生物学教研室,河北石家庄 0 5 0 0 1 7 ) 明显抑制 K 5 6 2细胞的增殖; H o c h e s t染色结果显示, P N P能诱 导 K 5 6 2细胞出现典型的凋亡形态,且凋亡率随多糖浓度增加

Ef fe c t s o f ph o l i o t a na me ko po l y s a c c ha -

r i de s o n K56 2 l e uk e mi a c e l l pr o l i f e r a - t i o n a nd Ca s pa s e . 3 e x pr e s s i o n i n v i t r o Z H AO J u n— Xi a, Z HE NG L i— F e n, ZH AO J u a n, S HE N Y u a n, WAN G Y an— L i n g, Y AN Yu n— i L De p a r t me n t o f Ce l l Bi o l o g y,Ba s i c Me d i c a l Co l l e g e,H e b e i Me di—

而增大,经P N P 1 0 0, 2 0 0, 4 0 0 mg/ L的处理后,凋亡率分别是 对照组的 3 . 1 5, 6 . 5 5和 8 . 6 2倍 .P N P能诱导凋亡相关基因 C a s p a s e一 3在 m R N A水平上的表达; We s t e r n B l o t显示 P N P能 诱导 C a s p a s e一 3编码蛋白的表达,且随多糖浓度的增加表达量

增加.结论: P N P对 K 5 6 2细胞增殖有抑制作用,并能促进其 凋亡; P N P通过诱导凋亡相关基因 C a s p a s e一 3表达促进细胞 凋亡.

c l a U n i v e r s i t y。S h i j i a z h u a n g, 0 5 O 0 1 7, C h i n a

【 A b s t r a c t】A I M: T o i n v e s t i g a t e t h e a n t i n e o p l a s t i c e f

f e c t o f p h o— l i o t a n a m e k o p o l y s a c c h a r i d e s( P N P )a n d t h e m e c h a n i s m o f i n d u— c i n g K 5 6 2 c e l l a p o p t o s i s .M ET HODS:MT T a s s a y w a s u s e d t o d e t e r mi n e t h e i n h i b i t o r y r a t e o f PNP wi t h d i f f e r e n t c o nc e n t r a t i o n s

【关键词 1滑菇多糖; K 5 6 2细胞;白血病;增殖;凋亡; C a s p a s e一 3基因

【中图号】Q 5 3; R 7 3

【文献标识码】A

o n he t p r o l i f e r a t i o n o f K 5 6 2 c e l l s,a n d t h e c e l l g r o w t h c u r v e w a s d r a w n .T h e c e l a p o p t o s i s i n d u c e d b y P NP w a s d e t e c t e d u n d e r l f u o r e s c e n c e mi c r o s c o p e it w h Ho e c h s t 3 3 2 5 8 d y e .R T— P C R a n d We s t e r n Bl o t a na ly s i s we r e a p p l i e d t o t e s t t h e e x p r e s s i on o f

0 引言近年来的研究发现,一些植物或真菌多糖除具有 免疫增强作用外,对癌细胞还有直接抑制和杀灭作 用 .筛选具抗癌作用的天然多糖及研究多糖抗癌机制已成为目前肿瘤研究领域的热点之一 .滑菇是 一

C a s p a s e一 3 i n K5 6 2 c e l l s .RES ULTS:MT I ' a s s a y s h o w e d t h a t t h e p r o l i f e r a t i o n o f K5 62 c e l l s wa s i n hi b i t e d a p pa r e n t l y a f t e r t r e a t me nt

种营养保健价值较高的食用菌.有研究表明,滑菇多糖 ( p h o l i o t a n a m e k o p o l y s a c c h a r i

d e, P N P )除对小鼠

wi t l l P N P f o _ r 4 8 h:Ho e c h s t s t a i n i n g s h o we d t h e t y p i c a l a p o p t o t i c f e a t u r e s i n K5 6 2 c e l l s a f t e r i n d u c e d b y P NP.a n d t h e a p o p t o s i s at r e i n c r e a s e d lo a n g w i t h t h e e l e v a t i o n o f P N P c o n c e n t r a t i o n .T h e a p o p t o i t c at r e s o f K5 6 2 c e l l s t r e a t e d b y 1 0 0,2 0 0,4 0 0 mL

S - 1 8 0细胞具有明显的抑制作用外,对正常以及荷瘤 小鼠的免疫功能均有增强作用 .但 P N P对人白血病细胞 K 5 6 2增殖的抑制作用及诱导细胞凋亡的机制国内外均少见报道.本研究通过观察 P N P对 K 5 6 2 细胞增殖的抑制作用和凋亡相关基因 C a s p a s e . 3的表达,旨在进一步探讨 P N P的抗肿瘤作用及诱导 K 5 6 2 细胞凋亡的机制.

P NP w e r e 3 . 1 5,6 . 5 5 nd a 8 . 6 2 t i me s a s mu c h a s c o n t r o l s .r e— s pe e i t v e l y .P NP c o u l d p o mo r t e t he e x pr e s s i o n o f Ca s pa s e一 3 a t b o t h

mR NA a n d p ot r e i n l e v e l s,a n d t h e g e n e e x p r e s s i o n ls a o i n c r e a s e d a l o n g wi h t he t r i s i n g o f P N P c o n c e n t r a t i o n . CONCLUS I ON: P NP c o ld u i hi n b i t t h e p ol r i f e r a t i o n o f K5 6 2 c e l l s a n d i n d u c e a p o p— t o s i s o f he t c e l l s, ma y b e b y u p— r e g u l a t i n g t h e e x

p r e s s i o n o f C a s p a s e - 3 .

1材料和方法 1 . 1材料 R P MI - 1 6 4 0培养基 (美国 G i b c o公司 ); ke mi a; p ol r i f e r a t i o n; a po p t o s i s; Ca sp as e一 3

【 K e y w o r d s】 p h o l i o t a n a m e k o p o l y s a c c h a r i d e s; K 5 6 2 c e l l s; l e u—

噻唑蓝 ( M1 T r ) (北京华美公司 ); H o e c h s t 3 3 2 5 8,一抗

【摘

要】目的:研究滑菇多糖 ( P N P )的抗肿瘤作用及诱导

( C a s p a s e一 3, B - a c t i n小鼠抗人抗体 ),二抗 (辣根过氧 化物酶标记的山羊抗鼠 I G) (美国S a n t a c r u z公司);

K 5 6 2细胞凋亡的机制 .方法:采用 M T T法检测 P N P对 K 5 6 2

细胞增殖的抑制作用;绘制生长曲线; H o c h e s t 3 3 2 5 8染色计算凋亡率; R T - P C R法、 We s t e r n B l o t方法检测凋亡相关基因 C a s p a s e - 3的表达 .结果: MT T分析表明, P N P作用 4 8 h后可 收稿日期: 2 0 0 7 - 0 3 - 0 6;接受日期: 2 0 0 7 05 - ̄5 通讯作者:闫蕴力 .T e l: ( 0 3 1 1 ) 8 6 2 6 5 5 5 8 E ma i l: Y a n y l@h e b m u . e d u . c n 作者简介:赵俊霞.博士生 (导师同蕴力) .T e l: ( 0 3 1 1 ) 8 6 2 6 5 6 1 5 E ma i l: z j 5 9 0@t o m. c o m

P N P (河北师范大学生命科学院生化与分子生物学系 王立安教授惠赠 ); K 5 6 2白血病细胞株 (引自中国医

学科学院血液病研究所 );倒置显微镜,荧光显微镜 (日本 O l y mp u s公司 ); C O培养箱 (日本 H i t a c h i公司); D Y Y - I I I 7 B型电泳仪 (北京六一仪器厂 );读胶仪A l p h a l m a g e r 1 2 0 0型 (美国 s T公司 ); P E 4 8 0型

D N A扩增仪 (美国 P E公司 );酶标仪 E L X. 8 0 0 (美国

滑菇多糖对K562白血病细胞增殖的抑制及Caspase-3基因表达的影响

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