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浙大生化实验报告氨基转换反应

浙大生化实验报告氨基转换反应

浙大生化实验报告氨基转换反应

实验报告

课程名称: 生化实验甲 指导老师: 成绩:__________________

实验名称: 氨基移换反应及其产物的鉴定 实验类型: 同组学生姓名:

一、实验目的和要求(必填) 二、实验内容和原理(必填)

三、实验材料与试剂(必填) 四、实验器材与仪器(必填)

五、操作方法和实验步骤(必填) 六、实验数据记录和处理

七、实验结果与分析(必填) 八、讨论、心得

一、实验目的和要求

1、学习鉴定氨基移换反应的简便方法及其原理;

2、学习纸层析的原理和操作技术。

二、实验基本原理 1.氨基移换反应:

在氨基移换酶(转氨酶)的催化下,氨基酸的α-氨基和α-酮酸的α-酮基之间发生的互换反应。 转氨酶的种类很多,任何一种氨基酸进行转氨作用时都由其专一的转氨酶催化。转氨酶的最适pH接近7.4,在各种转氨酶中,谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)的活性最强。

转氨酶广泛存在于机体的各种组织中。在肝、心、肾等组织中谷丙转氨酶(glutamic pyruvic transaminase, GPT)、谷草转氨酶(glutamic oxalacetic transaminase,GOT)活性较高。

GPT催化下的转氨基反应为:

L-谷氨酸脱氢酶在体内特别是在肝细胞内含量丰富,活性高,催化L-谷氨酸氧化脱-NH2,加碘乙酸能抑制其活性,从而可以保护氨基移换反应的产物L-谷氨酸。

本实验用纸层析法,检查由丙氨酸和α—酮戊二酸在肝细胞谷丙转氨酶(GPT) 的作用下所生成的谷氨酸,证明组织内的氨基移换作用。

2. 纸层析原理:

滤纸层析是以滤纸作为惰性支持物的分配层析。利用不同物质在两个互不相溶的溶剂中分配情况(溶解度)的不同来分离混合物的一种技术。

层析溶剂是由有机溶剂和水组成。滤纸纤维上羟基具有亲水性,因此吸附一层水作为固定相,而通常把有机溶剂作为流动相。进行分离时,由于被分离物质的组分在两相中的分布不同,随着流动相的移动,物质将在两相间进行连续的、动态的不断分配,从而造成不同组分移动的速度也不相同。易溶于流动相中的组分移动快,在固定相中溶解度大的组分移动慢,于是得到分离。

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